PRACTICA # 3 SIEMBRA EN MEDIOS DE CULTIVO IN VITRO

INTRODUCCIÓN

El cultivo de tejidos vegetales o cultivo in vitro de tejidos vegetales, es una técnica de reproducción en condiciones totalmente asépticas, en la que a partir de un pequeño segmento inicial de tejido es posible regenerar en poco tiempo miles o millones de plantas genéticamente iguales a la planta madre, cuando a este tejido le es aplicado un estímulo por medio de variables físicas y químicas controladas en un medio de cultivo.  A diferencia de las técnicas tradicionales de cultivo, esta poderosa herramienta permite la propagación de grandes volúmenes de plantas en menor tiempo; así como el manejo de las mismas en espacios reducidos. Por otro lado, la técnica es de gran utilidad en la obtención de plantas libres de patógenos; plantas homocigotas, en la producción de plantas en peligro de extinción, en estudios de ingeniería genética, etc. El enorme potencial que posee esta metodología ha propiciado que en los últimos 25 años se haya incrementado el número de laboratorios de cultivo de tejidos en el país para la producción comercial de plantas ornamentales y frutales al lo que ha motivado que algunos floricultores la estén utilizando como una alternativa viable en sus programas de producción (Kite, L., 1983)

En octubre de 1994, se inició la operación de un laboratorio de cultivo de tejidos vegetales in vitro, en el Colegio Profesional de Biólogos del Estado de Veracruz A.C. con la finalidad de desarrollar técnicas para la propagación de especies vegetales de interés ecológico y económico. En enero de 1995, se iniciaron las labores de siembra de tejidos en especies ornamentales de interés económico en la región. A la par de estas actividades, se ha hecho promoción del proyecto en los medios de comunicación locales con el fin de dar a conocer al público las ventajas de utilizar la técnica mencionada para la propagación de plantas ornamentarles difíciles de obtener por los métodos tradicionales., (Davies R.D. et al, 1980).

La totipotencialidad celular fue enunciada como teoría por Gottlieb Haberlandt en 1902, quien propuso que todas las células vegetales tienen la capacidad de regenerar plantas completas.

OBJETIVO

Conocer las técnicas de cultivo de explantes de papa en medios de cultivo in vitro.

MATERIALES Y METODOS

La presente práctica se realizo en las instalaciones del laboratorio de microbiología del Instituto Tecnológico de Ciudad Altamirano.

MATERIALES

·       Mango de bisturí

·       Pinzas de disección

·       Bisturí

·       Cajas de petrí

·       Frascos vacios

·       Cámara de flujo laminar

·       Explantes de papa

·       Mechero de alcohol

SUSTANCIAS

·       Medio MS esteril

·       Agua destilada

·       Alcohol de 70°

·       Alcohol de 96°

·       Cloralex

Después de haber esterilizado los medios MS y los materiales que se utilizaran se procedió a la siembra de explantes en la cámara de flujo laminar, la cual se desinfecto con anterioridad para evitar contaminación del medio.

Un integrante del equipo se lavo las manos con agua y con jabon para después desinfectar con alcohol de 96° y las metió en la cámara de flujo laminar mientras otro integrante cortaba los explantes para después llevarlos a la cámara de flujo laminar en un frasco, al que se le coloco la mitad de agua destilada y la otra mitad de cloralex, esto para desinfectar a los explantes se dejo desinfectando durante 5 min, después se hicieron dos lavados  el primero de un minuto y el segundo de 5 minutos. Se coloca el mechero de alcohol encendido en la cámara de flujo laminar, en un frasco vacio esteril se colocan las pinzas y el bisturí  los cuales se estarán desinfectando cada vez que se ocupen, la desinfección se realiza remojando el material (pinzas y bisturí) en alcohol de 70° y después exponerlo al fuego y se coloca en el frasco vacio para continuar con la siembra.

Para la siembra se corta la orilla inferior del explante ya que con el cloralex se quema y muere una pequeña porción del explante, se toma con las pinzas desinfectadas para depositarlo en el frasco con el medio MS este frasco se destapa y se mantiene la tapadera entre los dedos al igual que el frasco sin tocar el interior de ambos, sin meter los dedos en el interior del frasco se coloca el explante sobre el medio de cultivo tratando de ke este kede poco sumergido y con la punta hacia arriba.

Una vez terminada la siembra se taparon y sellaron los frascos para ser llevados al área de crecimiento

CONCLUSIÓN

La siembra de material in vitro se realiza de forma aséptica: esterilizando el material que se va a utilizar, desinfectándose las manos con alcohol, los resultados son favorables, es decir el material cultivado no se infecta de hongos o bacterias; mas la planta que utilizamos no se tenía en cuenta que la desinfección no debía ser con el mismo grado y tiempo que con los explantes de yuca  (manihot esculenta) por lo mismo se observo que en su mayoría la siembra de papa se contaminó con distintos  hongos y bacterias.

BIBLIOGRAFÍA

• Javier.90@hotmail.com.mx(Fossard.1999,http://cultivodevegetales.blogspot.mx/2010/09/explantes.html).
• Luis Mroginski, Pedro Sansberro y Eduardo Flaschland. 2010. Establecimiento de cultivos de tejidos vegetales. En: Biotecnología y Mejoramiento Vegetal II, Argenbio, INTA. pags.: 70-84.
• http://www.jardinbotanicodecordoba.com/inves_cons_cult_invi.php