2.3.7.4 Manejo del material transplantado

Todos los días se debe controlar el nivel de humedad en las almacigueras. Si es necesario, se aplica un riego con una pulverizadora manual, para mantener un ambiente húmedo a nivel del sustrato. A los 15 días del trasplante, se puede comenzar a levantar la cobertura de nylon en las horas de menor calor( temprano en la mañana o en la última hora de la tarde). Al comienzo las plantas se dejan media hora por día destapadas. A la semana siguiente se dejan destapadas durante una hora. Al mes del trasplante, se dejan tapadas durante la noche y si hay crecimiento de nuevas hojas, las plantas pueden permanecer destapadas. Las condiciones del cultivo in vitro , generan cambios en algunos aspectos anatómicos y fisiológicos de las plantas, por esta causa, durante la aclimatación, los cambios deben ser muy graduales, para minimizar el estrés y tener mayor tasa de sobrevivencia.

BIBLIOGRAFÍA

http://es.wikipedia.org/wiki/Micropropagaci%C3%B3n

2.3.7.3 Trasplante y adaptación bajo condiciones de invernadero

El estrés asociado a la transpiración acelerada de las plantas durante las etapas iniciales del trasplante puede reducir considerablemente la tasa de supervivencia. 

Por ello, es conveniente contar con instalaciones de invernadero o cámaras de crecimiento adecuadas para brindar temperatura y humedad relativa moderadas que permitan lograr la rusticación de las plantas en forma progresiva. Bajo condiciones ex vitro se utilizan diferentes substratos, mezclas de tierra y arena y/o abonos, los cuales convienen que estén debidamente desinfectados. 

BIBLIOGRAFÍA

http://www.argenbio.org/adc/uploads/Libro_INTA_II/Parte_I.pdf

2.3.7.2 Desinfección o esterilización del sustrato

Técnicas físicas: Estas técnicas están basadas en la utilización del calor como esterilizante, en sus diferentes formas de aplicación, como son la desinfección por calor y la solarización.

Desinfección del suelo con productos químicos: Esta técnica esta basada en el empleo de los distintos productos químicos y mediante los efectos de los mismos lograr la desinfección del suelo. Estos productos químicos son los siguientes:

Bromuro de Metilo,Cloropicrina,Dicloropropeno y sus mezclas,Metam - sodio y metam - potasio,Dazomet,Nema

Desinfección con vapor de agua:*

Es un método de desinfección del suelo en el que se emplea el vapor de agua como desinfectante de todos los parásitos existentes en el suelo. Dicho vapor se obtiene de una caldera móvil generalmente a 80 - 100ºC que mediante una serie de tuberías y tubos es conducida al suelo donde va desinfectándolo poco a poco a una profundidad variable (5 - 15 cm) según el sistema utilizado, y con una duración media del tratamiento comprendida entre 5 y 20 minutos.

Pero el efecto de este vapor también puede ser negativo ya que si se aplica a una profundidad demasiado elevada puede destruir las bacterias nitrificantes del suelo.

La efectividad del sistema es mucho mayor en suelos secos que húmedos por lo que será aconsejable que evitar aplicar riegos antes de efectuar el tratamiento.

La desinfección con vapor de agua es un método con una efectividad alta y su principal inconveniente es su alto costo.

Las desinfección por vapor de agua presenta ventajas e inconvenientes, como son:

Cuando se emplea este método, las bacterias amonificantes suelen ser destruidas por lo que se suele producir una elevación en el contenido en amoniaco del suelo, por lo que pueden producirse fitotoxicidades por una excesiva acumulación amoniacal.

De lo contrario cuando se realiza la desinfección con calor determinados elementos minerales pasan a formas mas asimilables por la planta, lo que en terrenos muy ricos pueden llegar a ocasionar riegos de salinidad.

BIBLIOGRAFÍA

http://www.infojardin.com/foro/showthread.php?t=120885

2.3.7.1 Tipos de sustratos

la elección del substrato, siendo el adecuado aquel que permita el normal crecimiento y desarrollo de las raíces. Se puede emplear: arena, perlita, turba, vermiculita,  o mezclas de ellos, teniendo la precaución de realizar una esterilización previa. Es conveniente  el agregado de fertilizantes, sea a través  del substrato (fertilizantes de liberación  controlada) o bien mediante el sistema de riego (fertilizantes solubles); empleándose  proporciones ricas en fósforo (N-P-K: 9-45-15) y potasio (N-P-K: 4-25-35) que favorecerán el  desarrollo radicular y la rustificación de las plantas

BIBLIOGRAFÍA

http://www.argenbio.org/adc/uploads/Libro_INTA_II/Parte_I.pdf

2.3.7 Trasplante al sustrato

Previo a su  siembra , el residuo gelificante adherido a las raíces se lava con agua corriente y se procede a su   siembra  en bolsas de polietileno con un sustrato adecuado que permita su  desarrollo por un lapso de dos meses para  su comercialización .

BIBLBIOGRAFÍA

http://www.centa.gob.sv/upload/laboratorios/biotecnologia/CULTIVO%20IN%20VITRO%20DE%20PLATANO.pdf

2.3.6.4 Pre adaptación y trasplante

Durante el período de incubación, los cultivos son expuestos a condiciones ambientales disí-miles al ambiente externo. La atmósfera interna se caracteriza por presentar una considerable variación diurna en la concentración de CO2, humedad relativa elevada, temperatura constante e intensidad lumínica baja. A su vez, el medio de cultivo compuesto  por concentraciones elevadas de azúcares (en aquellos sistemas heterótrofos y semiautótrofos de micropropagación), sales y reguladores del crecimiento, sumado a la ausencia de microorganismos, generan anormalidades  morfológicas, anató-micas y fisiológicas  que las plantas deberán corregir cuando son transferidas al ambiente externo. Este período de adaptación al nuevo hábitat es llamado  fase o etapa de aclimatación. La estrategia a implementarse durante el mencionado ciclo deberá contemplar el control minucioso de los parámetros ambientales (humedad, temperatura y luz) de tal manera que permita disminuir la deshidratación y, al mismo tiempo, estimular la fotosíntesis con el objeto de generar un rápido crecimiento  de los plantines.

BIBLIOGRAFÍA

http://www.argenbio.org/adc/uploads/Libro_INTA_II/Parte_I.pdf

2.3.6.3 Enraizamiento

Para enraizar los explantos se utilizan principalmente plantines individuales de un tamaño aproximado de 2 cm. Los brotes obtenidos durante la fase de multiplicación se transfieren a un medio libre de reguladores de crecimiento o que solo contenga hormonas del tipo de las auxinas. Algunas especies de plantas no necesitan pasar por esta etapa y emiten sus raíces en el mismo medio de cultivo donde desarrollan yemas nuevas, por lo tanto el proceso de multiplicación y enraizamiento transcurren en forma simultánea.

BIBLIOGRAFÍA

http://es.wikipedia.org/wiki/Micropropagación#Elecci.C3.B3n_de_un_medio_de_enraizamiento_de_los_explantos

2.3.6.2 Crecimiento de yemas adventicias

INICIACION DE LOS BROTES ADVENTICIOS

Se pueden iniciar nuevos ápices de ramas o brotes ya sea:

1) Directamente del explante

2) Indirectamente del callo que se forma en la superficie cortada del explante.

Los dos factores más importantes que afectan la iniciación de brotes adventicios son:

1) La relación del explante

2) El régimen de hormonas que se suministran a las plantas.

BIBLIOGRAFÍA

http://www.google.com.mx/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=9&cad=rja&ved=0CFcQFjAI&url=http%3A%2F%2Fwww.lamolina.edu.pe%2Fagronomia%2Fdhorticultura%2Fhtml%2Fpropagacion%2Ffitohormonas%2Fshuamanyauri.doc&ei=E5uMUJnFIcygqQHI1oCgBw&usg=AFQjCNEzB_pIJA0zWl8nAyQxzGVB6wFsog&sig2=dW4aiX5MiBKV2OwN0kLAYQ

2.3.6.1 Formación de callo

Un callo consiste de una masa amorfa surgida de la proliferación de células del parénquima. Frecuentemente es el resultado de una herida, un callo se forma en el corte de un tallo o raíz. Los callos no tienen patrones predecibles de organización, están presentes en centros localizados de actividad meristemática y a menudo aparecen en regiones cambiales rudimentarias con zonas de diferenciación vascular. Una de las características importantes de callo, desde un punto de vista funcional, es su irregular crecimiento, teniendo el potencial para desarrollar raíces normales, brotes y embriones que forman plántulas.

BIBLIOGRAFÍA

http://www.fca.uner.edu.ar/academicas/deptos/catedras/fisiologiaveg/m_didactico/manual_practicas/BDesarrolloED.pdf

2.3.6 Cambios fisiológicos del explante

Cuando la planta se encuentra en condiciones asepticas sufre cambios fisiológicos, muchas veces por la ausencia de la necesidad de realizar alguna de las funciones fisiológicas de la planta.

Algunos de los mas frecuentes se mencionan a continuación.

• Estomas atrofiados: muchas veces los estomas se atrofian en su función o no funcionan completamente 
• Cutícula delgada y con aberturas o no tiene cutícula.
• El parenquima de empalizada no esta finamente unido, ademas no se hace la fotosíntesis suficiente.
•  son plantas heterótrofas en cierto nivel.
• las raíces son delgadas, pocas y algunas no funcionan.

2.3.5.4 Humedad relativa

la humedad relativa en la que se encuentra el explante cultivado es de aproximadamente el 100%.

Estas plantas deben de ser posteriormente aclimatizadas en un invernadero, con condiciones de baja luminosidad y alta humedad relativa durante los primeros días.

BIBLIOGRAFÍA 

http://www.agrobiot.com/biotecnologia.php

2.3.5.3 Temperatura

La temperatura optima para el desarrollo de explantes sembrados en medios de cultivo es de entre 26 a 28°C. la mayoría de las veces los cultivos se encuentran en condiciones controladas donde se les puede dar las condiciones climaticas deseadas

2.3.5.2 Intensidad lumínica

Las planta in vitro requieren de solo 2000 lux para desarrollarse, como son plantas muy ricas en humedad un aumento de luz podria deshidratar seriamente a la planta dañando su esttructura, hasta provocarle la muerte.

Los plantines enraizados, deben ser aclimatados a las condiciones de humedad del invernadero disminuyendo progresivamente la humedad relativa e incrementando progresivamente la intensidad de luz

BIBLIOGRAFÍA 
http://es.wikipedia.org/wiki/Micropropagaci%C3%B3n#Aclimataci.C3.B3n_de_los_explantos_enraizados

2.3.5.1 Fotoperiodo

Puede considerarse como el conjunto de los procesos mediante los cuales muchos organismos y vegetales regulan sus funciones biológicas como puede ser el caso del crecimiento o la reproducción, utilizando como indicador la alternancia día-noche de los diversos días del año, donde encontramos días de larga duración y días de menor duración dependiendo de la estación del año y por lo tanto del ciclo del sol.

en lo que respecta a los explantes cultivados requieren de un aproximado de 10 hrs luz y 14 hrs noche

BIBLIOGRAFÍA

http://html.rincondelvago.com/fotoperiodo-vegetal.html

2.3.5 Condiciones de incubación

Para que una planta cresca naturalmente necesita de  5,000 a 8,000 Lux (Lux, es una cierta medida de luz natural); para un cultivo de tejido vegetal se necesita 2,000 a 2,500 Lux.

Se establece una temperatura de 18-25°C.

Debe de conservarse la polaridad de la planta madre; puede llegar a suceder una polaridad invertida (>x<) esto va depender de los ápices, raíces, hojas, semillas, tallos y yemas.

La fase gaseosa es nula o es muy poca. La concentración de CO2 al medio ambiente es de 0.03%.

Se habla de humedad relativa en este caso dentro del frasco, pues se pueden encontrar pequeñas gotas adheridas en la pared del mismo, esto es el 100% de la humedad que se contiene en el frasco. Es diferente la humedad en in vitro al ambiente natural.

Hay vitrificacion (es el hinchamiento por el exceso de agua en el explante de la planta) cuando los tejidos se han sometido en una humedad no factible para los explantes y requiere de una regulación.

Con el paso del tiempo los explantes en subcultivo pierden el poder vegetativo (mutación) y aumenta las mutaciones (variación somaclonal).

La estación depende mucho de la planta, pues existe una fase llamada letargo (modo stop o sin funcionamiento), por ejemplo el caso de la ilama.

BIBILOGRAFÍA

http://www.slideshare.net/pa47484/biotecnologia-2862397

2.3.4.3 Siembra de diferentes medios: sólidos y líquidos

El metabolismo de los tejidos puede modificarse dependiendo de las características del medio de cultivo (líquido o semi-sólido). Dependiendo de las características del medio de cultivo (líquido o semi-sólido).

• En el caso de un medio sólido, la concentración y calidad del ágar pueden tener importantes efectos en el desarrollo del cultivo (hiperhidricidad, crecimiento lento, etc.)

• El cultivo en medio líquido se utiliza cuando la propagación in vitro es desarrollada a través de las siguientes vías:

- Inducción de embriogénesis

- Cultivo de protoplastos

- Cultivo de suspensiones celulares

El metabolismo de los tejidos puede modificarse dependiendo de las características del medio de cultivo (líquido o semi-sólido). Dependiendo de las características del medio de cultivo (líquido o semi-sólido).

• En el caso de un medio sólido, la concentración y calidad del ágar pueden tener importantes efectos en el desarrollo del cultivo (hiperhidricidad, crecimiento lento, etc.)

• El cultivo en medio líquido se utiliza cuando la propagación in vitro es desarrollada a través de las siguientes vías:

- Inducción de embriogénesis

- Cultivo de protoplastos

- Cultivo de suspensiones celulares

Propiedades físicas del medio

• Intercambio gaseoso: Los recipientes de cultivo se tapan con un film de polietieleno para posibilitar el intercambio de gases. La organogénesis puede verse modificada si el intercambio de gases se ve dificultado.

-Ej: La inducción de yemas a partir de callos de tabaco se reduce si no hay suficiente oxígeno

-La acumulación de etileno puede inhibir la regeneración de brotes

• pH: - Constituye un factor crítico

- Se ajusta en el rango 5,5-5,8

- Constituye un factor crítico

- Se ajusta en el rango 5,5-5,8

-Se modifica durante el crecimiento de los cultivos

-Determina la disponibilidad de ciertos compuestos y regula un amplio rango de reacciones bioquímicas que tienen lugar en las celulas vegetales en cultivo. Se suele ajustar a un valor cercano al celular